1. Calculer le nombre de micopuits souhaité. Retirer les micopuits restants et les placer avec le dessiccant dans le
sac en plastique refermable, sceller et conserver à 2-8°C pour une utilisation ultérieure.
2. Ajouter les calibrateurs et les échantillons :
2. 1 Puits témoin négatif : Ne pas ajouter de réactifs.
2. 2 Puits des calibrateurs : Ajouter 100 µL de calibrateurs dans les puits de contrôle désignés.
2.3 Puits d'essai : Ajouter 100 µL de diluant d'échantillon dans les puits d'essai, puis ajouter 10 µL d'échantillon dans le puits correspondant.
2.4 Agiter doucement la plaque pendant 20 secondes, puis couvrir la plaque avec le scellant.
3. Incubation : Incuber la plaque à 37°C pendant 30 minutes.
4. Étape de lavage (Peut être effectuée manuellement ou avec un laveur automatique) :
Lavage manuel : Retirer soigneusement le mélange d'incubation en jetant la solution dans un récipient à déchets. Remplir chaque
puits avec 350 µL de tampon de lavage dilué et agiter doucement pendant 20-30 secondes. Jeter complètement la solution de lavage. Répéter 4
fois supplémentaires. Après avoir terminé la dernière étape de lavage, tapoter la plaque sur du papier absorbant pour éliminer le liquide résiduel.
Lavage automatique : Le laveur de plaques automatique doit être calibré pour assurer un lavage efficace. Remplir chaque puits avec 350 µL
de tampon de lavage dilué et laisser tremper pendant 20-30 secondes. Aspirer complètement tous les puits. Répéter 4 fois supplémentaires.
5. Conjugué : Ajouter 100 µL de conjugué dans chaque puits, à l'exception du puits témoin négatif.
6. Incubation : Couvrir les puits et incuber à 37°C pendant 30 minutes.
7. Étape de lavage : Laver la plaque 5 fois comme décrit à l'étape 4.
8. Substrat : Ajouter 50 µL de Substrat A et 50 µL de Substrat B dans chaque puits, y compris le puits témoin négatif. Agiter doucement les
micropuits pendant 20 secondes. Incuber à 37°C à l'obscurité pendant 15 minutes.
9. Solution d'arrêt : Ajouter 50 µL de solution d'arrêt dans chaque puits. Une couleur jaune doit se développer dans les puits contenant des spécimens positifs.
10. Lecture des résultats : Lire à 450/630-700 nm dans les 30 minutes.
1. Remarque : La microplaque peut également être lue à 450 nm, mais il est fortement recommandé de la lire à 450/630-700 nm pour
de meilleurs résultats.
Chronométrie : Lire la densité optique (DO) de l'échantillon à 450 nm avec un lecteur de microplaques.
La DO moyenne du témoin négatif ≤ 0,1 et la DO moyenne du témoin positif ≥ 0,8, le test est valide,
sinon le test est invalide.
Valeur seuil (C.O.) = La DO moyenne du témoin négatif x 3 (calculée par 0,10 lorsque la DO moyenne
du témoin négatif est < 0,10, calculée par la valeur réelle lorsque la DO moyenne du témoin négatif
Résultats positifs : DO de l'échantillon ≥ C.O.
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