Anti kits d'essai d'anticorps d'Elisa Test Kit Anti TPO de peroxydase thyroïde

Anti-TPO peroxydase Elisa Kit d'antithyroïde

1. Utilisation prévue

Immunoessai pour la détermination quantitative in vitro des anticorps à la peroxydase thyroïde en sérum humain. L'anti détermination du ‐ TPO est employée comme aide dans le diagnostic des maladies thyroïdiennes autoimmunes.

2. Résumé

• La peroxydase spécifique de ‐ thyroïde (TPO) est présente sur les microsomes des thyrocytes et est exprimée sur sa surface apicale de cellules. Dans la synergie avec la thyroglobuline (Tg) cette enzyme a une fonction essentielle dans l'iodation de L tyrosine de ‐ et l'accouplement chimique du ‐ et de l'iodotyrosine mono en résultant de di ‐ pour former les hormones thyroïdiennes T4, T3, et pi3.
• TPO est un autoantigen potentiel. Des titres élevés de sérum des anticorps à TPO sont trouvés sous plusieurs formes de thyroïdite provoquées par l'autoimmunité. Le distillateur a fréquemment trouvé que le terme « anticorps microsomique » provient du moment où TPO n'avait pas été encore identifié comme antigène dans l'autoimmunité provoquée par des microsomes. Dans le sens clinique l'anti ‐ TPO de deux termes et l'anticorps microsomique peuvent être employés synonyme ; il y a des différences, cependant, en ce qui concerne les méthodes d'essai.
• D'anti titres élevés du ‐ TPO sont trouvés dans jusqu'à 90 % de patients présentant la thyroïdite de Hashimoto chronique. Dans la maladie de tombes, 70 % des patients ont un titre élevé. Bien que la sensibilité de la procédure puisse être augmentée en déterminant simultanément d'autres anticorps thyroïde (anti ‐ Tg, anticorps de ‐ de récepteur de ‐ de TSH - TRAb), une conclusion négative n'élimine pas la possibilité d'une maladie auto-immune. L'importance du titre d'anticorps ne se corrèle pas avec l'activité clinique de la maladie. Les titres au commencement élevés peuvent devenir négatifs après des périodes prolongées de maladie ou pendant la remise. Si les anticorps réapparaissent remise suivante, alors une rechute est probable.
• Considérant que les essais microsomiques habituels d'anticorps utilisent les microsomes non épurés comme préparation d'antigène, les anti essais du ‐ TPO emploient une peroxydase purifiée. Les deux procédures sont de représentation comparable en termes de sensibilité clinique, mais un meilleur ‐ de sort à la cohérence de sort de ‐ et à la spécificité clinique plus élevée peut être prévu de l'anti ‐ TPO examine en raison du plus de haute qualité de l'antigène a employé. L'enzyme a lié des analyses d'immunosorbant emploie les anticorps anti-humains humains d'IgG d'antigène et de lapin (anti-IgG).

3. Principe d'essai

Méthode indirecte, durée totale d'analyse : 70 minutes.

L'anti-TPO ELISA utilise la phase solide, technique ELISA indirecte pour la détection des anticorps à TPO de la procédure en deux étapes d'incubation. Les bandes de microwell de polystyrène sont pre- enduites des antigènes humains fortement immunoreactive de TPO. Pendant la première étape d'incubation, d'anti-TPO anticorps spécifiques, si actuels, seront liés à la phase solide ont enduit des antigènes d'un préenduisage de TPO. Les puits sont lavés pour enlever les protéines sériques non liées, et des anticorps anti-humains d'IgG de lapin (anti-IgG) conjugués à la peroxydase de raifort d'enzymes (conjugué de HRP-) sont ajoutés. Pendant la deuxième étape d'incubation, ces anticorps HRP-conjugués seront liés à tous les complexes d'antigène-anticorps (IgG) ont précédemment formé et le HRP-conjugué non lié est alors enlevé par le lavage. Des solutions de chromogène contenant Tetramethylbenzidine (TMB) et peroxyde d'urée sont ajoutées aux puits et en présence du l'antigène-anticorps-anti-IgG immunocomplex (HRP), les chromogènes sans couleur sont hydrolysés par le conjugué attaché de HRP à un produit de couleur bleue. La couleur bleue tourne jaune après arrêt de la réaction avec de l'acide sulfurique.

La quantité d'intensité de couleur peut être mesurée et elle est proportionnelle à la quantité d'anticorps capturée dans les puits, et à la quantité d'anticorps dans l'échantillon respectivement.

4. Les matériaux de réactifs ont fourni

• Microplate enduit, 8 X12 bandes, 96 puits. Enduit d'un préenduisage avec de l'antigène humain de TPO.

• Calibreurs, 6 fioles, 1 ml chacun, prêtes à employer ; Concentrations : 0 (A), 25 (B), 50 (C), 100 (D), 250 (E) et 500 (F) IU/mL.

• Conjugué d'enzymes, 1 fiole, 11,0 ml d'anticorps anti- humains marqués d'IgG de lapin de HRP (peroxydase de raifort) (anti-IgG) dans le tampon Tris-NaCl contenant BSA (albumine de sérum de boeuf). Contient 0,1% agents de conservation ProClin300.

• Diluant de sérum : 1 fiole, 11mL. Contenir des sels de tampon et un colorant

• Concentré de solution de lavage, 1 fiole, 25 ml (40X s'est concentré), solution de lavage de PBS-tween.

• Substrat, 1 fiole, 11ml, prêt à employer, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Arrêtez la solution, 1 fiole, 6,0 ml de 1 mole/l d'acide sulfurique.

• IFU, 1 copie.

• Couvercle de plat : 2 morceaux.

Matériaux exigés (mais non fourni)

• Lecteur de Microplate avec la capacité absorbante de la longueur d'onde 450nm et 620nm.

• Joint de Microplate.

• Incubateur.

• Dispositif trembleur de plat.

• Micropipettes et micropipettes multicanales livrant 50µl avec une précision de meilleur que 1,5%.

• Papier absorbant.

• Eau distillée

5. Procédure d'essais

• Employez seulement le nombre de puits requis et composez les puits de microplate pour qu'on analyse chaque calibreur et échantillon.

• Ajoutez le µL 100 des calibreurs à chaque puits.

• Ajoutez le µL 100 du diluant témoin (couleur verte) à chaque puits excepté les Calibreur-puits.

• Ajoutez le µL 10 de l'échantillon à chaque puits de diluant témoin (NOTE : Les réactifs en Wells tourneront la couleur bleue du vert), puis secouent 30 secondes.

• Couvrez le plat de couvercle de plat et incubez au °C 37 pendant 30 minutes.

• Jetez le contenu du plat micro par la décantation ou l'aspiration. Si décantant, tapez et épongez le sec de plat avec le papier absorbant.

• Ajoutez le µL 350 de la solution de lavage, le décantez (robinet et tache) ou l'aspirez. Répétez 4 fois supplémentaires pour un total de 5 lavages. À la fin du lavage, inversez le plat et tapez n'importe quelle solution résiduelle de lavage sur le papier absorbant.

• Ajoutez le µL 100 du conjugué d'enzymes,

• Couvrez le plat de couvercle de plat et incubez au °C 37 pendant 30 minutes.

• Ajoutez le µL 350 de la solution de lavage, le décantez (robinet et tache) ou l'aspirez. Répétez 4 fois supplémentaires pour un total de 5 lavages. À la fin du lavage, inversez le plat et tapez n'importe quelle solution résiduelle de lavage sur le papier absorbant.

• Ajoutez le µL 100 du substrat à chaque puits. Couvrez et incubez à la température ambiante (18-25℃) dans l'obscurité pour la réaction pendant 10 minutes. Ne secouez pas le plat après addition de sous-état.

• Ajoutez le µL 50 de la solution d'arrêt à chaque puits.

• Secouez pendant 15-20 secondes pour mélanger le liquide dans les puits. Il est important de s'assurer que les changements de couleur bleus à jaunir complètement.

• Lisez l'absorbance de chaque puits à 450 nanomètre (utilisant 620 à 630 nanomètre comme longueur d'onde de référence pour réduire au minimum des imperfections bonnes) dans un lecteur micro de plat. Les résultats devraient être lus d'ici 30 minutes de s'ajouter arrêtent la solution.