Anticorps contre le virus de l'hépatite B (HBcAb)

ÉLISA TestLe K.il est

Uniquement à des fins de diagnostic in vitro et d' utilisation professionnelle.

Nom du produit

Kit de test ELISA anti-HBc (sérum/plasma)

Utilisation prévue

Ce kit de test ELISA anti-HBc est une détection qualitative des anticorps contre l' antigène de base du virus de l' hépatite B (HBcAb) dans le sérum/ plasma humain.Le réactif convient au dépistage clinique et au diagnostic de l'infection par le virus de l'hépatite B dans le sérum/plasma humain..

Principe de l'essai

Le virus de l'hépatite B est une enveloppe,virus à double brin d'ADN appartenant à la famille des Hepadnaviridae et reconnu comme la principale cause de l'hépatite transmissible par le sang avec le virus de l'hépatite C (VHC)L'infection par le VHB induit un éventail de manifestations cliniques allant d'une maladie légère et non apparente à une hépatite fulminée, à des maladies hépatiques chroniques sévères,qui, dans certains cas, peut entraîner une cirrhose et un carcinome du foieLa classification d'une infection par l'hépatite B nécessite l'identification de plusieurs marqueurs sérologiques exprimés au cours de trois phases (incubation, aiguë et convalescente) de l'infection.

Le principal composant du virus est l' antigène de base de l' hépatite B (HBcAg).Cet antigène du noyau est constitué d'un seul polypeptide d'environ 17 kD qui est déchargé lors de la désagrégation des particules du noyau.Au moins un déterminant immunologique est présent dans l'antigène.

Peu de temps après le début de l' HBsAg, des anticorps contre l' HBcAg (anticorps totaux anti-HBc et IgM) apparaissent et ne disparaissent jamais.une infection par l'hépatite B peut être contractée sans anti-HBc immunologiquement détectableLe dépistage de l'hépatite B anti-HBc donne des données sur la prévalence de l'hépatite B dans différentes populations.chroniqueL'identification de l'anti-HBc est essentielle lors du diagnostic dans un cadre clinique.le marqueur anti-HBc permet un diagnostic correct et un suivi adéquat de la progression du virusL' anti-HBc peut éventuellement être le seul indicateur d' une infection par l' hépatite B (y compris d' autres tests sur des patients HBsAg négatifs).

Le système du test ELISA HBcAb est fondé sur le principe de la phase solide, d'incubation concurrentielle en une étape.il est en concurrence avec l'anti-HBc monoclonal conjugué à la peroxidase du raifort (HRP-Conjugate) pour une quantité fixe d'HBcAg purifié pré-enduit dans la microplateSi aucun anti-HBc n'est présent, l'anti-HBc HRP-conjugué sera lié aux antigènes à l'intérieur des puits.Après l'ajout des solutions de chromogènes A et B dans les puits et pendant l'incubation, un produit de couleur bleue apparaît. Après l'arrêt de la réaction avec l'acide sulfurique, la couleur bleue devient jaune. La présence d'anticorps contre l'HBcAg dans l'échantillon est indiquée par une couleur basse,ou pas de couleur du tout.

Exigences relatives à l'échantillon

1.Collecte de spécimens:Aucune préparation spéciale du patient n'est requise. Le prélèvement de l'échantillon doit être effectué conformément aux pratiques normales de laboratoire. Des échantillons de sérum/plasma frais peuvent être utilisés pour ce test.Le sang prélevé par ponction veineuse doit être autorisé à coaguler naturellement et complètement. Le sérum doit être séparé du caillot le plus tôt possible pour éviter l' hémolyse des globules rouges.Il faut veiller à ce que les échantillons de sérum/plasma soient clairs et non contaminés par des micro-organismes.

2.H estLes échantillons très lipémiques, jauneurs ou hémolytiques ne doivent pas être utiliséscar ils peuvent donner de faux résultats dans l'essai.Ne pas désactiver par chaleur échantillonsLes échantillons présentant une contamination microbienne visible ne doivent jamais être utilisés.

3. L' HBcAb ELISA est destiné uniquement à l' analyse d' échantillons individuels de sérum/ plasma.

4- Transport et stockage: conserver les échantillons à 2 à 8°C. Les échantillons qui ne sont pas nécessaires à l'analyse dans un délai de 3 jours doivent être conservés congelés (-20°C ou moins).Pour expédition, les échantillons doivent être emballés et étiquetés conformément aux réglementations locales et internationales en vigueur pour le transport des échantillons cliniques et des agents éthologiques.

Procédure d'essai

1Tous les réactifs doivent être laissés à température ambiante pendant 15 minutes avant utilisation.

2. Le tampon de lavage doit être dilué à 1:40 avec de l'eau distillée avant utilisation.

3L'échantillon doit correspondre au nombre de microplaques, chaque plaque doit être dotée de 3 puits de contrôle négatif, de 2 puits de contrôle positif et d'un puits de contrôle blanc.(Si détecté avec détection à double longueur d'onde, il est interdit de régler aucun puits de contrôle vide).

Remarque: utiliser une pointe de pipette séparée pour chaque échantillon, contrôle négatif et contrôle positif afin d'éviter la contamination croisée.

4. Ajouter un échantillon de 50 μL dans le puits correspondant (lorsque ce kit est utilisé pour le diagnostic clinique auxiliaire, l'échantillon à tester doit être dilué avec une solution saline normale à 1h30 pour l'essai.Lorsqu'il est utilisé pour des investigations épidémiologiques, l'échantillon d'origine peut être détecté ), ajouter 50 μL de contrôle négatif et de contrôle positif aux puits de contrôle négatif et aux puits de contrôle positif.Ajout de l'enzyme conjuguée 50μL (ne pas ajouter dans le puits vide).

5Agiter pendant 30 secondes à l'aide d'un oscillateur (cette étape est très importante).

6. À la fin de l'incubation, retirer et jeter le couvercle de la plaque. Retirer, ajouter le tampon de lavage à chaque puits pendant 20 secondes. Répétez 5 fois. Après le cycle de lavage final, lavez la plaque de lavage.tourner la plaque sur du papier à enduire ou une serviette propre, et appuyez dessus pour enlever les résidus.

7. Ajouter le substrat A (50μL) et le substrat B (50μL) (ne pas ajouter dans le puits vierge). Mélanger doucement en agitant. Incuber à 37 °C pendant 15 minutes avec la membrane de la plaque d'étanchéité scellant la plaque.

8. Ajouter 50 μL de solution d'arrêt à chaque puits (ne pas ajouter dans le puits vierge). mélanger doucement en agitant, lire l'absorbance dans les 10 minutes suivant l'arrêt de la réaction.Calibrer le lecteur de plaque avec le puits en blanc et lire l'absorbance à 450nm.Si un instrument à double filtre est utilisé, régler la longueur d'onde de référence à 630 nm. Ne pas régler de puits vides est autorisé si vous utilisez une longueur d'onde double pour détecter. Calculer la valeur de coupe et évaluer les résultats.