VCAM-1 RUO Elisa Kit Molecule d'adhésion des cellules endothéliales vasculaires humaines 1

Description du produit:

Objectif

Ce kit permet de déterminer les concentrations de VCAM-1 dans le sérum humain, les supernats de culture cellulaire et autres fluides biologiques.

Principe de l'analyse

Le kit analyse le niveau de VCAM-1 humain dans l'échantillon, utilisez l'anticorps VCAM-1 humain purifié pour recouvrir les puits de la plaque de microtiter, faites un anticorps en phase solide, puis ajoutez VCAM-1 aux puits,Anticorps combinés VCAM-1 qui sont marqués avec HRP, devient complexe anticorps-antigène-enzyme-anticorps, après lavage complètement, ajouter TMB solution de substrat, TMB substrat devient de couleur bleue à HRP enzyme-catalysé,La réaction est terminée par l'ajout d'une solution d'acide sulfurique et le changement de couleur est mesuré spectrophotométriquement à une longueur d'onde de 450 nmLa concentration de VCAM-1 humain dans les échantillons est ensuite déterminée en comparant la D.O. des échantillons à la courbe standard.

Matériaux fournis avec le kit

Paramètres techniques:

Exigences relatives aux échantillons

• L'extraction doit être effectuée le plus rapidement possible après la collecte des spécimens, et conformément à la littérature pertinente, et l'expérience doit être réalisée le plus rapidement possible après l'extraction.l'échantillon peut être conservé à -20 °C pour préserverÉvitez les cycles de congélation et de décongélation répétés.
• Impossible de détecter l'échantillon contenant du NaN3, car le NaN3 inhibe le HRP actif.

Procédure d'évaluation

• Diluer et ajouter l'échantillon:Diluer Densité initiale Norme comme indiqué dans le tableau suivant:

2. Ajouter l'échantillon: placer les puits vides séparément (les puits de comparaison vides n'ajoutent pas l'échantillon et le réactif HRP-Conjugate, autrement chaque étape de l'opération est la même).Ajouter 50 μl de norme à la stripplate de Microelisa, ajouter de l'échantillon de dilution 40μl au puits d'échantillon d'essai, puis ajouter l'échantillon d'essai 10μl (l'échantillon de dilution finale est de 5 fois), ajouter l'échantillon aux puits, ne pas toucher la paroi du puits autant que possible, et mélanger doucement.

3Incubation: après fermeture de la plaque avec une membrane de la plaque de fermeture, incubation pendant 30 min à 37°C.

4. Configurer le liquide: solution de lavage 30 fois (ou 20 fois) diluée 30 fois (ou 20 fois) avec de l'eau distillée et de la réserve.

5Laver: découvrir la membrane de la plaque de fermeture, jeter le liquide, sécher par balancement, ajouter du tampon de lavage à chaque puits, encore pendant 30s puis vider, répéter 5 fois, sécher par tapotement.

6. Ajouter une enzyme: ajouter 50 μl de réactif HRP-conjugué à chaque puits, sauf puits vierge.

7- Incubez: opération avec 3.

8- Le lavage: opération avec 5.

9. Couleur: ajouter à chaque puits la solution de chromogène A 50ul et la solution de chromogène B 50ul, éviter la conservation de la lumière pendant 10 min à 37°C

10. Arrêter la réaction: ajouter Stop Solution50μl à chaque puits, Arrêter la réaction ((la couleur bleue change de couleur jaune).

11. Analyse: prenez le puits vide à zéro, lisez l' absorbance à 450 nm après ajout de solution stop et dans les 15 min

Calculer:

Prenez la densité standard comme horizontale, la valeur OD pour la verticale, dessinez la courbe standard sur du papier graphique,Trouver la densité correspondante selon la valeur de l'échantillon OD par la courbe de l'échantillon, multiplié par le multiple de dilution, ou calculer l'équation de régression linéaire de la courbe standard avec la densité standard et la valeur OD,avec la valeur OD de l'échantillon dans l'équation,calculer la densité de l'échantillon, multiplié par le facteur de dilution, on obtient la densité réelle de l'échantillon.