• Préparer les réactifs: diluer 1 volume de tampon de lavage concentré (20×) avec 19 volumes d'eau distillée, bien mélanger.
• Ajoutez des échantillons: ouvrez la poche en feuille et retirez la microplate.distribuer 50 μL d'échantillon ou de contrôle négatif ou de contrôle positif aux puits respectifsIl vibre doucement la plaque.
• Incubation: couvrir la microplate avec le couvercle de la plaque et incuber la microplate revêtue dans un bain d'eau contrôlé par un thermostat ou dans un incubateur de microplate à 37 °C pendant 60 minutes.
• Lavez la plaque: enlevez le couvercle de la plaque. aspirer le contenu de tous les puits. remplir les puits avec le tampon de lavage dilué (10 à 20 secondes pour tremper) puis aspirer à nouveau.Répétez la procédure 5 fois.Assurez-vous que le volume de repos est minime en tapant sur une plaque de papier absorbant.
• Ajouter du conjugué: ajouter 100 μl de conjugué à chaque puits (sauf pour le puits vide).
• Incubation: couvrir la microplate et incuber la plaque à 37°C pendant 30 minutes.
• Lavez la plaque: Répétez la procédure de lavage comme à l'étape 4.
• Ajouter du substrat: ajouter 50 μl de solution de substrat A et 50 μl de solution de substrat B à chaque puits, bien mélanger, couvrir et incuber à 37 °C pendant 30 minutes.
• Réaction d'arrêt: ajouter 50 μl de solution d'arrêt à chaque puits, bien mélanger.
• Lire l'absorbance à 450 nm. Si une mesure à deux longueurs d'onde est utilisée, la longueur d'onde de référence doit être sélectionnée entre 620 nm et 690 nm.

Précautions à prendre

• Laissez tous les composants du kit atteindre la température ambiante avant utilisation.
• Suivez strictement les instructions pour contrôler la température et le temps de réaction.
• Ne mélangez pas les composants de numéros de lot différents.
• Ne pas utiliser les composants du kit après leur date de péremption.