Essai stimulant d'hormone thyroïde d'ESSAI de la thyrotropine TSH ELISA

KIT d'ESSAI chaud de la vente TSH ELISA
Référence : Essais DS177701 96

Utilisation prévue
Immunoessai pour la détermination quantitative in vitro de la thyrotropine en sérum humain.

1. Résumé

• l'hormone Thyroïde-stimulante (TSH, thyrotropine) est une glycoprotéine ayant un poids moléculaire d'approximativement 30000 daltons et se composant de deux sous-unités.
• La mesure en sérum de concentration de la thyrotropine souvent (TSH), d'une glycoprotéine avec un poids moléculaire de 28 000 daltons et sécrété du pituitaire antérieur, est généralement considérée comme l'indicateur le plus sensible disponible pour le diagnostic de l'hypothyroïdisme (pituitaire) primaire et secondaire (1,2).
• Les mesures de TSH sont également utiles en différenciant l'hypothyroïdisme (hypothalamique) secondaire et tertiaire de la maladie thyroïdienne primaire. La version de TSH du pituitaire est réglée par le facteur sortant de thyrotropine (TRH), qui est sécrété par l'hypothalamus, et par action directe de T4 et de triiodothyronine (T3), les hormones thyroïdiennes, au pituitaire.
• Les niveaux d'augmentation du T3 et du T4 ramène la réponse du pituitaire aux effets stimulatoires de TRH. Dans l'hypothyroïdisme secondaire et tertiaire, les concentrations de T4 sont habituellement basses et les niveaux de TSH sont généralement bas ou normaux. L'insuffisance pituitaire de TSH (hypothyroïdisme secondaire) ou l'insuffisance de la stimulation du pituitaire par TRH (hypothyroïdisme tertiaire) cause ceci.
• L'essai de stimulation de TRH différencie ces conditions. Dans l'hypothyroïdisme secondaire, la réponse de TSH à TRH est émoussée tandis qu'une normale ou une réaction différée est obtenue en hypothyroïdisme tertiaire. De plus, l'avènement des analyses immunoenzymometric a fourni au laboratoire la sensibilité suffisante pour permettre la différenciation de l'hyperthyroïdisme de la population euthyroïde et prolonger l'utilité des mesures de TSH. Cette méthode est une analyse de la seconde génération, qui fournissent les moyens pour la discrimination dans la gamme hyperthyroid-euthyroïde. (3)

2. Les matériaux de réactifs ont fourni
• Microplate enduit, 8 X12 bandes, 96 puits, enduits d'un préenduisage avec anti-TSH monoclonal de souris.
• Calibreurs, 6 fioles, 1 ml chacun, prêtes à employer ; Concentrations : 0 (A), 0,5 (B), 2 (C), 5 (D), 10 (E) et 25 (F) μIU/mL.
• Le conjugué d'enzymes, 1 fiole, 6,0 ml de HRP (peroxydase de raifort) a marqué la souris anti-TSH monoclonal dans le tampon Tris-NaCl contenant BSA (albumine de sérum de boeuf). Contient 0,1% agents de conservation ProClin300.
• Substrat, 1 fiole, 11ml, prêt à employer, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Arrêtez la solution, 1 fiole, 6,0 ml de 1 mole/l d'acide sulfurique.
• Concentré de solution de lavage, 1 fiole, 25 ml (40X s'est concentré), solution de lavage de PBS-tween.
• IFU, 1 copie.
• Couvercle de plat : 1 morceau.

Matériaux exigés (mais non fourni)
• Lecteur de Microplate avec la capacité absorbante de la longueur d'onde 450nm et 620nm.
• Joint de Microplate.
• Incubateur.
• Dispositif trembleur de plat.
• Micropipettes et micropipettes multicanales livrant 50μl avec une précision de meilleur que 1,5%.
• Papier absorbant.
• Eau distillée

3. Procédure d'essais

Assurez que les échantillons, les calibreurs, et les contrôles des patients sont à la température ambiante (℃ 18-25) avant la mesure. Mélangez tous les réactifs en inversant doucement avant l'utilisation.

• Employez seulement le nombre de puits requis et composez les puits des microplates pour qu'on analyse chaque calibreur et échantillon. • Ajoutez le µL 25 des calibreurs ou des échantillons à chaque puits.

• Ajoutez le µL 100 du conjugué d'enzymes à chaque puits.

• Secouez le microplate doucement pendant 30 secondes pour se mélanger.

• Couvrez le plat de couvercle de plat et incubez à 37℃ pendant 60 minutes.

• Jetez le contenu du plat micro par la décantation ou l'aspiration. Si décantant, tapez et épongez le sec de plat avec le papier absorbant.

• Ajoutez le µL 350 de la solution de lavage, le décantez (robinet et tache) ou l'aspirez. Répétez 4 fois supplémentaires pour un total de 5 lavages. Un joint automatisé de bande de microplate peut être employé. À la fin du lavage, inversez le plat et tapez n'importe quelle solution résiduelle de lavage sur le papier absorbant.

• Ajoutez le µL 100 du substrat à chaque puits.

• Couvrez et incubez à la température ambiante (18-25℃) dans l'obscurité pour la réaction pendant 20 minutes. Ne secouez pas le plat après addition de sous-état.

• Ajoutez le µL 50 de la solution d'arrêt à chaque puits.

• Secouez pendant 15-20 secondes pour mélanger le liquide dans les puits. Il est important de s'assurer que les changements de couleur bleus à jaunir complètement.

• Lisez l'absorbance de chaque puits à 450 nanomètre (utilisant 620 à 630 nanomètre comme longueur d'onde de référence pour réduire au minimum des imperfections bonnes) dans un lecteur micro de plat. Les résultats devraient être lus d'ici 30 minutes de s'ajouter arrêtent la solution