Nom du produit

Kit de détection RT-PCR en temps réel du VHD (virus de l'hépatite D)

Utilisation prévue

Pour leen vitro détection qualitative de l'ARN du VHDdans le sérum ou le plasma humain.diagnostic, surveillance et quantification de la charge viralede l' infection par le virus de l' hépatite D.

Paramètres techniques:

Principe du test

• RT-PCR en temps réel: vise une région protégée de laGénome du VHD(par exemple,R0ouHDAggénétique) utilisantdes amorceurs spécifiques à la séquence et des sondes TaqMan(par exemple, marqué FAM).

• Haute sensibilité et spécificité: Aucune réactivité croisée avec le VHB, le VHC ou d' autres virus de l' hépatite.

• Contrôle interne (CI): inclus pour surveiller l'extraction de l'ARN et l'inhibition par PCR (par exemple, RNase P ou contrôle de l'ARN synthétique).

Composants du kit

1. Le mélange maître RT-PCRContient:transcriptase inverse, Taq polymérase à démarrage à chaud, dNTP et tampon optimisé.

2. Mélange de préliminaire/sonde: oligonucléotides spécifiques au VHD avec sonde fluorescente (par exemple, FAM pour le VHD, HEX/VIC pour le CI).

3. Contrôles:

   • Contrôle positif: ARN HDV synthétique ou virus inactivé.

   • Contrôle négatif: eau sans nucléase.

   • Contrôle interne(le cas échéant).

4. Autres réactifs: DNase/RNase eau, tubes de réaction (le cas échéant).

Flux de travail

1. Préparation des échantillons: Extraction d' ARN viral (compatible avec leQIAamp, MagMAX ou systèmes automatisés) et

2. Réglage de la PCR: Mélanger l'ARN extrait avec le mélange maître et les primers/sondes.

3. Amplification:

   • Transcription à l'envers: 50°C pendant 10 à 15 min.

   • Activation par PCR95°C pendant 2°5 min.

   • Le vélo: 40 à 45 cycles de 95°C (10 secondes) à 60°C (30 à 60 secondes, lecture de la fluorescence).

4. Analyse de la situation:

   • Quantitatifs: courbe standard pour la charge virale (UI/mL ou copies/mL).

   • Qualité: valeur limite de Ct pour les résultats positifs/négatifs.

Caractéristiques de performance

• Sensitivité:≤ 10 ‰ 50 UI/ml(95% LOD).

• Plage linéaire:102 ∼ 108 UI/ ml(ensemble quantitatif).

• Spécificité: Aucune réactivité croisée avec le VHB, le VHC, le VIH ou d' autres agents pathogènes courants.

• Précision: CV < 5% pour la variabilité intra- et inter-essai.

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